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  • 產品名稱:T-2 毒素ELISA試劑盒技術指導
  • 產品型號:
  • 產品產地:美國
  • 訪問次數:2441
  • 產品價格:電議
  • 簡介內容:T-2 毒素ELISA試劑盒技術指導用于玉米,玉米粉,玉米胚芽粉,玉米蛋白粉,玉米/大豆混合物中 T-2 毒素的定量檢測。
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詳細內容

T-2 毒素ELISA試劑盒技術指導

 本試劑盒僅供研究使用。
1使用目的:
本試劑盒用于玉米,玉米粉,玉米胚芽粉,玉米蛋白粉,玉米/大豆混合物中 T-2 毒素的定量檢測。
2實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,在微孔板包被有 T-2 毒素偶聯抗原,加入 T-2 毒素標準品或樣品,游離 T-2 毒素與微孔條上預包被的 T-2 毒素偶聯抗原互相競爭抗 T-2 毒素抗體酶標記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變為黃色,用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測,吸光值與樣品中 T-2 毒素含量成反比,通過標準曲線計算樣品中 T-2 毒素的含量。
3試劑盒組成
3.1 預包被的 T-2 毒素偶聯抗原的可拆酶標板:1 塊(12 孔×8 條)。
3.2 T-2 毒素標準品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是:0 ng/ml,0.01 ng/ml,0.02 ng/ml,0.04 ng/ml,0.08 ng/ml,0.16 ng/ml
3.3 抗 T-2 毒素抗體酶結合物:1 瓶(6ml)。
3.4 顯色液 A:1 瓶(6ml)。
3.5 顯色液 B:1 瓶(6ml)。
3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。
3.7 樣本稀釋液:1 瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。
3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9 說明書一份。
4需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm酶標儀。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒。
6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。
6.4 標準品中含有T-2毒素,使用時應特別注意,操作時應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響
實驗結果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果
6.9 混合試劑時應避免起泡。
7工作液準備
7.1 T-2毒素標準品溶液:0ng/ml,0.01ng/ml,0.02 ng/ml,0.04 ng/ml,0.08 ng/ml,0.16 ng/ml
7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑:已備用,避免光線直照
7.4 反應終止液:已備用
8樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman No 1濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2)
9酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時;販刂潦覝兀25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50µl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗T-2毒素抗體酶結合物
9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)
9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
9.4 反應
9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動反應板使之徹底混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl終止液,混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。
10結果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值
10.1.2以T-2毒素濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為T-2毒素濃度的對數值,求得反對數即為測定液中T-2毒素濃度C(ng/ml)
10.1.3由于樣品經過了預先稀釋,因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
11特異性
物質 交叉反應
T-2毒素——————————100%
12試劑盒參數
本試劑盒檢測下限為0.01ng/ml B0吸光度最佳值應大于1.0
試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。
13標準曲線模式(僅供參考)
試劑盒提供的標準曲線范圍為0.01ng/ml~0.16ng/ml。
14分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。

原創作者:上海恒遠生物科技有限公司

標簽:T-2 毒素 ELISA試劑盒免費代測 

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