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解決方案

大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA實驗說明

閱讀次數:59    發布時間:2023/12/26 9:46:36

檢測范圍:15ng/L - 480ng/L


使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中前列腺素E2(PGE2)含量。

實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠前列腺素E2(PGE2)水平。用純化的大鼠前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2),再與HRP標記的前列腺素E2(PGE2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠前列腺素E2(PGE2)濃度。 

標本要求 :
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列表在小試管中進行稀釋。
480ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
240ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
120ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
60ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
30ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

完整版說明書可咨詢我司業務員。上海恒遠生物科技有限公司擁有自己的實驗室,備有專業的技術研發團隊,長期致力于各種生物試劑,細胞,血清,ELISA試劑盒的研發與銷售,實驗提供免費代測服務,并提供精湛的技術服務,如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢,為您提供專業的一對一技術指導。
 

原創作者:上海恒遠生物科技有限公司

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