技術服務專區
酶聯免疫(ELISA)代測服務
ELISA(酶聯接免疫吸附反應分析)是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的..
組織形態學實驗技術服務
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規染色,特殊染色,組織形態圖..
Western Blot實驗技術服務
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作..
解決方案

細胞破碎技術攻略大全

閱讀次數:87    發布時間:2023/11/22 10:14:16

細胞破碎技術是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內容合成的非分泌型生化物質(產品)的基礎。結合重組DNA技術和組織培養技術上的重大進展,以前認為很難獲得的蛋白質現在可以大規模生產。


目前已發展了多種細胞破碎方法,以便適應不同用途和不同類型的細胞壁破碎。 破碎方法可規納為機械法和非機械法兩大類,一起來學習下吧。

機械法:
1.高壓勻漿破碎法(homogenization)   
高壓勻漿器是常用的設備,它由可產生高壓的正向排代泵(positive displacenemt pump)和排出閥(discharge valve)組成,排出閥具有狹窄的小孔,其大小可以調節。細胞漿液通過止逆閥進入泵體內,在高壓下迫使其在排出閥的小孔中高速沖出,并射向撞擊環上,由于突然減壓和高速沖擊,使細胞受到高的液相剪切力而破碎。在操作方式上,可以采用單次通過勻漿器或多次循環通過等方式,也可連續操作。為了控制溫度的升高,可在進口處用干冰調節溫度,使出口溫度調節在20℃左右。在工業規模的細胞破碎中,對于酵母等難破碎的及濃度高或處于生長靜止期的細胞,常采用多次循環的操作方法。 

2.振蕩珠擊破碎法 (Skaking Bead)   
將等體積的小量組織樣品與高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋蓋微量管中,再加入緩沖液與穩定成份到1.5ml的體積, 用6500RPM振蕩機高速上下振動8秒,休息8秒,再振動8秒即可.此方法是目前最快且一次可處理最多樣品的方法. 一臺機器最多可以在一天處理2400支樣品.對小量且多樣的人很方便!

3.高速攪拌珠研磨破碎法(fine grinding)   
研磨是常用的一種方法,它將細胞懸浮液與玻璃小珠、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌,使細胞獲得破碎。在工業規模的破碎中,常采用高速珠磨機 。

4.超聲波破碎法(ultrasonication)   
超聲波破碎法利用超聲波振蕩器發射的15-25kHz的超聲波探頭處理細胞懸浮液。 超聲波振蕩器有不同的類型,常用的為電聲型,它是由發生器和換能器組成,發生器能產生高頻電流,換能器的作用是把電磁振蕩轉換成機械振動。超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質兩種型式,一般破碎效果后者比前者好。

非機械法:
1.滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock)   
滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內水分便向外滲出,細胞發生收縮,當達到平衡后,將介質快速稀釋,或將細胞轉入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內,引起細胞快速膨脹而破裂。

2.凍融破碎法(freezing and thawing)   
將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反復多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內水結晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。

3.酶溶破碎法(enzyme lysis)   
酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陰性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陽性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶。

4.化學破碎法(chemical treatment)   
采用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑

恒遠品牌細胞推薦:
人胚皮膚成纖維細胞;CCC-ESF-1
人小膠質細胞;HMC3
人骨肉瘤細胞帶熒光素酶 143B/LUC
人腎小管上皮細胞;HKC
小鼠胰腺癌細胞
小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12
小鼠小腦細胞 C8-D1A
倉鼠腎成纖維細胞;BHK-21
雞胚胎成纖維細胞;UMNSAH/DF-1
鴨子胚胎成纖維細胞;Duckembryo

上海恒遠生物科技有限公司擁有自己的實驗室,備有專業的技術研發團隊,長期致力于各種生物試劑,細胞,血清,ELISA試劑盒的研發與銷售,實驗提供免費代測服務,并提供精湛的技術服務,如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢,為您提供專業的一對一技術指導。 

原創作者:上海恒遠生物科技有限公司

品質保證

防偽易碎商標貼,四招助您分辨真假。

送貨保障

產品均有現貨,多家快遞公司合作準時到達。

售后服務

產品及實驗問題,提供技術支持保障。

  • 電話:18221656311
  • 手機:18221656311
  • 聯系人:錢經理

上海恒遠免疫學第三方檢測中心

微信掃描二維碼,參與上海恒遠活動,

勁爆優惠觸手可得!

主營產品:

酶聯免疫試劑盒,酶聯免疫實驗代測,elisa試劑盒,原裝elisa試劑盒,elisa檢測試劑盒,進口血清

公司名稱:上海恒遠生物科技有限公司 公司地址:上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座 郵政編碼:201615 郵箱:2885617636@qq.com

聯系人:錢經理 聯系電話:18221656311 ICP備案號: 滬ICP備11004148號-22 技術支持:阿儀網

嬌嬌

小李

小強

小李

小錢

亚洲av日韩av永久无码下载,女人18毛片A级毛片免费视频,欧美综合天天夜夜久久,精品欧美中国福利第一导航